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液相色谱法测定中药洗剂中苦参碱的含量

点击次数:2859 更新时间:2010-02-24

   1  仪器和试药

  液相色谱;TCQ-250超声波清洗仪(北京医疗设备二厂);电子天平AEG-220紫外分光光度仪UV-265甲醇为优级纯;乙腈为色谱纯;其他试剂均为分析纯;苦参碱对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号:110805-200306)。
  2  方法与结果

  2.1  色谱条件

  Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相乙腈-甲醇-磷酸盐溶液(25∶10∶65);检测波长220 nm;流速1 ml/min;柱温25 ℃。

  2.2  供试品溶液的制备

  取本品50 ml,摇匀,精密量取5 ml,加浓氨试液调pH=10后,用氯仿(30、30、30、20、20 ml)提取5次,合并提取液,挥干氯仿,加甲醇适量溶解残渣,滤过,滤渣、容器用甲醇洗涤3次,每次5 ml,合并洗液与滤液,定量转移至100 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,用0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。

  2.3  对照品溶液的制备

  取经P2O5减压干燥至恒重的苦参碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每毫升约含0.530 mg的对照品溶液。

  2.4  阴性对照品溶液的制备

  取缺苦参总生物碱的样品适量,依供试品溶液的制备法,制备阴性对照品溶液。

  2.5  系统适用性试验

  分别取对照品溶液、阴性对照品溶液、供试品溶液各10 μl注入液相色谱仪,记录色谱图。结果表明供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,有相同保留时间的色谱峰,阴性对照无干扰。理论塔板数为8 128。

  2.6  线性关系考察

  精密称取苦参碱对照品适量,依对照品溶液制备法制备浓度0.106、0.318、0.530、0.742、0.954 g/L的溶液,分别精密吸取上述溶液5 μl,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积积分值为纵坐标,对照品质量为横坐标绘制标准曲线,得回归方程为:Y=38788X-53(r=0.999 8),表明苦参碱在0.53~4.77 μg呈线性关系。

  2.7  精密度试验

  精密吸取上述苦参碱对照品溶液,重复进样5次,测定苦参碱峰面积,RSD为1.58%,表明精密度良好。

  2.8  稳定性试验

  精密量取本品适量,依供试品溶液制备法制备供试品溶液,再精密吸取供试品溶液10 μl,依上述色谱条件在0、2、4、6、8 h分别进行测定,记录峰面积,RSD为1.49%,表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

  2.9  重复性试验

  分别精密量取同一样品5份,依供试品溶液制备法制备5份供试品溶液,精密吸取供试品溶液各10 μl,依上述色谱条件测定,RSD为0.95%,表明该方法的重复性良好。

  2.10  加样回收率试验

  精密量取0.5 ml已知含量(35.767 g/L)的妇得康洗剂5份,分别添加苦参碱对照品适量,按上述供试品溶液制备法制备加样回收供试品溶液,并进行测定,计算回收率,见表1。结果苦参碱的平均回收率为98.6%,RSD为1.17%。

  2.11  样品测定

  精密量取样品适量,依供试品溶液制备法制备供试品溶液,分别精密吸取对照品溶液5 μl与供试品溶液10 μl注入液相色谱仪,依上述色谱条件测定,记录苦参碱峰面积,重复测定2次,取平均值。结果见表2。表1  苦参碱的加样回收率试验结果2  10批样品中苦参碱的含量

  3  讨论

  3.1  检测波长的选择

  精密称取干燥至恒重的苦参碱对照品适量,用流动相溶解配成标准溶液,对苦参碱标准溶液进行全波长扫描,结果表明标准溶液在200 nm处有zui大吸收,考虑紫外吸收末端干扰大,且样品中苦参碱含量高,故选择检测波长为220 nm。

  3.2  流动相的选择

  选择了3种流动相:(1)乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(1∶9),氢氧化钠溶液调节pH至6.0;(2)乙腈-0.005 mol/L庚烷基磺酸钠溶液(25∶75);(3)乙腈-甲醇-磷酸盐溶液(25∶10∶65)。经多次测试结果表明,流动相(1) 峰分离不好,流动相(2)的峰型不好,出现脱尾现象,流动相(3)出峰时间合理,峰型好,分离度大于1.5。

  3.3  萃取次数的考察

  取洗剂5 ml,加浓氨试液调pH=10后,分别用氯仿(30、30、30、20、20、20 ml)提取3、4、5、6次,合并提取液,挥干氯仿,加甲醇适量溶解残渣,滤过,滤渣,容器用甲醇洗涤3次,每次5 ml,合并洗液与滤液,定量转移至100 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,通过比较峰面积,5次萃取基本可将苦参碱萃取*。

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